પોલિએક્રીલામાઇડ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે સાવચેતીઓ

· પોલીએક્રીલામાઇડજેલને એક્રેલામાઇડ મોનોમર, પોલિમરાઇઝેશન શરૂ કરતી સામગ્રી, ઉત્પ્રેરક અને મીઠું અને બફર મિશ્રણનો અધિકાર એકસાથે ઉપયોગ કરીને બનાવવું જોઈએ.

· એક્રેલામાઇડઅને BIS (N, N '- મિથિલિન ડબલ એક્રેલામાઇડ) એ મોનોમર ફોર્મ જેલ મેટ્રિક્સ છે.

· એમોનિયમ પર્સલ્ફેટ એડહેસિવ પોલિમરાઇઝેશન પ્રક્રિયા શરૂ કરે છે. ગુંદર બનાવવા માટે પાણીમાં તૈયાર કરેલા 10% એમોનિયમ પર્સલ્ફેટ દ્રાવણની જરૂર પડે છે. મોટાભાગની માહિતી સક્રિય ઉપયોગની જરૂરિયાત દર્શાવે છે. જો કે, 10% દ્રાવણને પ્રવૃત્તિમાં નોંધપાત્ર નુકસાન વિના કેટલાક અઠવાડિયા સુધી 4℃ પર મૂકી શકાય છે. 10 મિલી સુધી બનાવો અને જ્યારે ગુંદર એકત્ર થવામાં નિષ્ફળ જાય ત્યારે કાઢી નાખો.

ટિપ: ટકાવારીએક્રેલામાઇડસિક્વન્સિંગમાં ગુંદર અને પ્રોટીન ગુંદર સમાન નથી. જો પહેલાથી બનાવેલા એક્રેલામાઇડ: BIS સોલ્યુશનનો ઉપયોગ કરી રહ્યા છો, તો યોગ્ય બોટલ મેળવવાની ખાતરી કરો.

· TEMED (N, N, N ', N ' - ટેટ્રામિથાઈલ એથિલેનેડીઆમાઈન) એક ઉત્પ્રેરક છે, જે ભૂરા રંગની બોટલમાં રેફ્રિજરેટરમાં મૂકવામાં આવે છે. ગુંદર રેડતા પહેલા ઉમેરો.

· ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસમાં વપરાયેલ પોલિએક્રીલામાઇડ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ ગ્લાસ દરેક વખતે પહેલા અને પછી ધોવા જોઈએ. ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ પછી, ગરમ સાબુવાળા પાણીમાં નરમ બ્રશ અને કપડાથી ધોઈ લો, નિસ્યંદિત પાણીથી ધોઈ લો અને સૂકવવા માટે ઊભા રહો.

· ભેજ અને ધૂળ હોલો પોલિમરથી થઈ શકે છે. ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ પહેલાં, કાચની પ્લેટને ગ્લાસ ક્લીનરથી સાફ કરો અને તેને સોફ્ટ બ્રશથી સાફ કરો. નિસ્યંદિત પાણીથી ધોઈ લો અને પેપર વાઇપથી સારી રીતે સૂકવી લો. કાગળથી સાફ કરતા પહેલા 70% ઇથેનોલથી કોગળા કરવાથી સાફ કરવામાં મદદ મળે છે અને સૂકવણી ઝડપી બને છે. ક્રમિક રીતે એક્રેલામાઇડના નમૂનાઓ ઉમેરો: BIS, પાણી, બફર સોલ્યુશન, એમોનિયમ પર્સલ્ફેટ, TEMED. સારી રીતે હલાવો અને તરત જ રેડો.

પોલિમરાઇઝેશન પહેલાં પોલિએક્રીલામાઇડને ગેસ મુક્ત કરવું જરૂરી નથી. (ઓક્સિજન પોલિમરાઇઝેશનને અટકાવે છે તેથી પરપોટા દૂર કરવા માટે એક્રીલામાઇડને વેક્યૂમમાં મૂકવામાં આવતું હતું.)

આડી ગુંદર બિંદુ નમૂના ટીપ્સ.

· નીચેના બોક્સમાં કાળા કાગળનો ટુકડો મૂકો, કાળા રંગની પૃષ્ઠભૂમિ પર, જેથી વધુ સ્પષ્ટ રીતે જોવા માટે થોડો છિદ્ર બનાવી શકાય.
· ગુંદર ટાંકી ભરેલું બફર, કોલોઇડની ઉપર.
જો ધાર પર પ્રકાશ હોય, તો પ્રકાશ ચાલુ કરો, કોલોઇડને પ્રકાશવા દો. નમૂનાને પાઇપેટમાં દોરો.
· ઓટોમેટિક પાઇપેટિંગ ડિવાઇસનો ઉપયોગ કરીને.
· ૧૦-૨૦૦ mu માં ૧ પ્રવાહી મૂવિંગ પોઈન્ટનો ઉપયોગ નમૂના પરના મોટાભાગના બિંદુઓમાં કરી શકાય છે. ખૂબ જ નાના નમૂના છિદ્રો (૧૦μ૧ કરતા ઓછા) માટે, ગુંદરને સિક્વન્સ કરવા માટે વપરાતું લાંબુ પીપેટ હેડ વધુ અનુકૂળ છે.

· નમૂનામાં ડૂબાડેલી પાઇપિંગ, ધીમે ધીમે ફરતા પ્રવાહીને શ્વાસમાં લેવાથી. નમૂના ગ્લિસરીનથી ચીકણો દેખાઈ શકે છે, અને ઝડપી પમ્પિંગથી પાઇપેટ હેડમાં હવાના પરપોટા ખેંચાઈ શકે છે.

· પાઇપેટિંગ હેડ શ્વાસમાં લીધા પછી, પ્રવાહી હેડને પાઇપની ધાર પર ધીમેધીમે ખસેડો અથવા કાગળ સાફ કરો, પ્રવાહી હેડને ટીપાંની બહાર ખેંચો. નમૂનાને ચૂસશો નહીં તેની કાળજી રાખો.

નમૂનાને નમૂનાના છિદ્રમાં મૂકો.

· પાઇપેટિંગ ડિવાઇસ થોડું દબાણ રાખવા માટે, નમૂનાઓને ઓવરફ્લો લિક્વિડ હેડને સહેજ ખસેડો.
· બફરમાં દાખલ કરાયેલ પાઇપેટિંગ હેડ, સ્પોટ હોલ કરતા થોડું ઊંચું, હકારાત્મક દબાણ જાળવી રાખે છે. પાઇપેટની ટોચ નાના છિદ્રમાં દાખલ કરી શકાય છે.
· ધીમે ધીમે અને સ્થિર રીતે નમૂનાઓ બહાર કાઢો. પાઇપેટ ટીપ પોઇન્ટ સેમ્પલ હોલની ઉપર મૂકવામાં આવે છે, અને સેમ્પલ છિદ્રમાં ડૂબી જશે. સેમ્પલને સિંક થવા દો જેથી સેમ્પલ હોલ અંદર ધકેલવાને બદલે ભરાઈ જાય.
· પ્રવાહી માથાવાળા નમૂનાના છેલ્લા ટીપા પછી, પ્રવાહી બીજા પગમાં જશે, ધીમે ધીમે પ્રવાહી ચાલને ઉપર ઉઠાવશે, બફરમાંથી બહાર નીકળી જશે.

વર્ટિકલ ગુંદર સેમ્પલિંગ કેવી રીતે કરવું?

· કાચના બે ટુકડા વચ્ચે ઊભી ગુંદર બિંદુ નમૂના છિદ્રો રચાય છે. ખૂબ જ પાતળા ગુંદરમાં, પીપેટ હેડ બે કાચની પ્લેટો વચ્ચે પણ દાખલ કરી શકાતું નથી. ગ્લિસરીનનું ધ્યાન રાખો! પીપેટ હેડને નમૂનાના છિદ્ર પર મૂકો અને નમૂના છિદ્રમાં ડૂબી જશે.
· પોઈન્ટ સેમ્પલ પહેલાં, પોલીપ્રોપીલીન એસિલ જેલ સેમ્પલ હોલના વર્ટિકલ પોઈન્ટને સાફ કરીને સાફ કરવાનું ભૂલશો નહીં. અનપોલિમરાઇઝ્ડ એક્રેલામાઇડ અને સેમ્પલ હોલના તળિયે દેખાતા પાણીને ધોઈ નાખો. પાણી સેમ્પલ હોલને નોંધપાત્ર રીતે નાનું બનાવી શકે છે. 25 મિલી અથવા 50 મિલી સિરીંજ અને 18-ગેજ સોયનો ઉપયોગ કરો. ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ બફરમાં રેડો અને સેમ્પલ હોલને કાળજીપૂર્વક ફ્લશ કરો.
· નમૂનાના છિદ્રને જોવું મુશ્કેલ હોઈ શકે છે, પરંતુ તે જ સમયે, બાકીનું સરળ છે. જો વધારાના છિદ્રો હોય, તો નમૂના બફરનું પરીક્ષણ બ્રોમોફેનોલ વાદળીથી કરી શકાય છે.